Estado actual, proyecciones y perspectivas de la fertilización in vitro (FIV) en la ganadería bovina en Colombia.

La biotecnología reproductiva ha sido una herramienta fundamental en la producción de embriones de la especie bovina en Colombia, con lo cual se ha logrado un avance significativo en cuanto a nivel de productividad, calidad y eficiencia reproductiva. Aunque, tradicionalmente ha sido de difícil acceso a los pequeños productores pecuarios por los altos costos. La aplicación de la técnica de fertilización in vitro (FIV) ha abierto las puertas a la posibilidad de obtener embriones bovinos tanto para la investigación científica como para el sector comercial. Actualmente, los ovocitos son obtenidos a través de ovarios recolectados en plantas de beneficio o de bovinos de alta calidad genética por medio de aspiración folicular con ultrasonido, donde los ovocitos obtenidos son posteriormente colocados en medios de maduración, fecundados con semen de alto valor genético y cultivados en condiciones especiales durante unos días. Por último, los embriones son aptos para ser transferidos en fresco a una hembra receptora o para su posterior criopreservación. Dicha técnica ofrece grandes beneficios a futuro para los productores pecuarios colombianos, pues se logra obtener una mejora en la eficiencia productiva. Además, se logra un aumento en la velocidad de mejoramiento genético de los sistemas de producción ganaderas colombianas. Por lo cual, se hace necesario mejorar la eficiencia de la técnica para aumentar el número de embriones producidos y obtener rendimientos que sean rentables para los ganaderos.Reproductive biotechnology has been a fundamental tool in the production of bovine embryos in Colombia, which has achieved significant progress in terms of productivity, quality and reproductive efficiency, which has traditionally been denied to small producers. The high costs of accessing it. The maturation of oocytes and the application of in vitro fertilization techniques (IVF) has opened the door to the possibility of obtaining bovine embryos for scientific research and for the commercial sector that increasingly fancy this type of embryos produced by the Application of reproductive biotechnologies. Actually oocytes are obtained through ovaries harvested from profit plants or cattle of high genetic quality by means of follicular aspiration with ultrasound, where the oocytes obtained are later placed in maturation media, fertilized with semen of high genetic value, and grown in special conditions for a few days. Finally the embryos are apt to be transferred n fresh to a receiving female or for their subsequent cryopreservation. The in vitro fertilization (IVF) technique offers great benefits for Colombian livestock producers in the future, since it improves production efficiency and in addition, it improves the breeding speed of Colombian livestock farms, where It is necessary to improve the protocols to increase the number of embryos produced and to obtain yields that are profitable for the breeders

Valoración espermática de semen bovino criopreservado con tres curvas de temperatura en la hacienda La Victoria del cantón Bucay.

La presente investigación tuvo como objetivo, valorar la calidad espermática de semen bovino criopreservado con tres curvas de temperatura en la Hacienda La Victoria del cantón Bucay, se aplicó un diseño completamente al azar con tres tratamientos correspondientes a las curvas de congelación y 5 repeticiones por cada tratamiento, se obtuvo un total de 15 pajuelas evaluadas, para el trabajo de campo se realizó la colecta de semen con ayuda de un electroeyaculador, para medir variables precongelación espermática como son: edad y peso del toro, volumen, color, olor y pH del eyaculado y las morfoanomalías y medir las variables postcongelación que son: motilidad masal, motilidad individual progresiva, concentración espermática, viabilidad espermática y la integridad de la cromatina del espermatozoides. Para las variables como volumen de eyaculado y pH del eyaculado se utilizó la estadística descriptiva (media y desviación estándar). Para el resto de las variables se realizó un análisis de la varianza de ADEVA separación de medias a través de la prueba de Tukey con un nivel de significancia de p<0.01. Los resultados obtenidos determinaron que la viabilidad espermática, como la motilidad individual progresiva se obtienen al utilizar una curva de temperatura en el agua de criopreservación de 3,8°C, mientras que la mayor motilidad masal y a menor cantidad de espermatozoides con morfoanomalías se obtuvo al aplicar una temperatura más elevada de 4.2°C. En cuanto al costo de la tecnología aplicada se observó que la inversión total del experimento fue de 147,63 USD. Se concluye que la evaluación de la calidad del semen bovino permite identificar y eliminar aquellos animales que puedan presentar problemas de infertilidad y seleccionar los mejores bovinos para los programas reproductivos, por lo tanto, se recomiendo realizar futuras investigaciones, sobre criopreservación.The present research aimed to evaluate the sperm quality of cryopreserved bovine semen with three temperature curves in La Victoria Farm of Bucay Canton. A completely random design was applied with three treatments corresponding to the freezing curves and 5 repetitions for each treatment. obtaining a total of 15 straws evaluated. For the field work, semen collection was carried out with the help of an electroejaculator, to measure sperm pre-freezing variables such as: age and weight of the bull, volume, color, odor and pH of the ejaculate and morphoanomalities and measure the post freezing variables that are: masal motility, progressive individual motility, sperm concentration, sperm viability and the integrity of the sperm chromatin. For variables such as ejaculate volume and ejaculate pH, descriptive statistics (mean and standard deviation) were used. For the rest of the variables, an analysis of the variance of ADEVA Separation of means was performed through the Tukey test with a significance level of p<0.01. The results obtained determined that sperm viability, such as progressive individual motility are obtained by using a temperature curve in cryopreservation water of 3.8°C while the higher masal motility and the lowest number of spermatozoa with morphoanomalities are obtained by applying a higher temperature of 4.2°C. As for the economic analysis, it was observed that the total cost of the experiment was 147.63 USD. It is concluded that the evaluation of the quality of bovine semen allows to identify and eliminate those animals that may present infertility problems and to select the best cattle for reproductive programs. It is recommended to carry out future research on cryopreservation

Biotecnologías de reproducción animal con posibilidad de aplicación para optimizar el potencial reproductivo y productivo de los animales. Una revisión

Animal reproductive biotechnology, represents an opportunity to optimize the potential reproductive and productive animals. The aim of this paper is a brief review of biotechnology in animal reproduction with future possibility of application to optimize thepotential reproductive and productive animals, such as in vitro fertilization, cloning and transgenesis.Las biotecnologías de reproducción animal, representan una oportunidad para optimizar el potencial reproductivo y productivo de los animales. El objetivo de este trabajo es presentar una breve revisión de las biotecnologías de reproducción animal con posibilidad futura de aplicación para optimizar el potencial reproductivo y productivo de los animales, tales como: fecundación in vitro, clonación y transgénesis

Genotipificación y análisis de genes de interés comercial de reproductores bovinos de la estación experimental Pastaza de la ESPOCH.

El presente trabajo de Integración Curricular tuvo como objetivo realizar la genotipificación y análisis de genes de interés comercial de reproductores en la Estación Experimental Pastaza perteneciente a la Escuela Superior Politécnica de Chimborazo. La investigación fue considerada como experimental y se determina una población constituida por dos ejemplares de la raza Charoláis, el estudio inició por la evaluación de fertilidad de los reproductores, extracción y congelación del semen, toma de muestra para el análisis de laboratorio, registro de ejemplares y finalmente se elaboró una ficha técnica con información de los ejemplares; para evaluar la fertilidad se utilizó estadística descriptiva con la finalidad de obtener parámetros de interés. Además, se empleó el método STRS para la determinación de la genotipificación. Todo el análisis se llevó a cabo en el laboratorio de Biotecnología Genética (BIOTECGEN S.A) conjuntamente con un trabajo de campo de 180 días utilizando materiales de campo, laboratorio, equipos y reactivos. En cuanto a genotipificación respecto al ejemplar FCP Samuel 0610: se determinan que cinco pares de alelos correspondientes al 29,41% son homocigóticos y 12 pares de alelos (70,59%) son heterocigóticos y en el segundo ejemplar FCP TEO 0616: 6 pares de alelos representado por 35,29% son homocigóticos y 11 pares de alelos (64,71%) son heterocigóticos. En conclusión, se determina que la calidad genética de los reproductores es elevada, el toro FCP Samuel 0616 mostró características de interés comercial más adecuadas; se recomienda a la Estación Experimental Pastaza efectuar análisis similares a nuevos grupos de reproductores bovinos para mantener una base de datos para estudios posteriores.The objective of this Currículum Integration work was to carry out genotyping and analysis of genes of commercial interest ofbreeders at Estación Experimental Pastaza belonging to Escuela Superior Politécnica de Chimborazo. The research was considered as experimental and a population consisting of two specimens of the Charolais breed is determined, the study began by the evaluation of fertility of the breeders, extraction and freezing of semen, sampling for laboratory analysis, registration of specimens and finally a technical sheet was prepared with infonnation on the specimens. Descriptive statistics was used to evaluate fertility in order to obtain parameters of interest. In addition, the STRS method was used for the determination of genotyping. All the analysis was carried out in the Genetic Biotechnology laboratory (BIOTECGEN S.A) together with a field work of 180 days using field materials, laboratory, equipment and reagents. Regarding genotyping with respect to the specimen FCP Samuel 0610: it is determined that five pairs of alleles corresponding to 29,41% are homozygous and 12 pairs of alleles (70,59%) are heterozygous and in the second specimen FCP TEO 0616: 6 pairs of alleles represented by 3 5,29% are homozygous and 11 pairs of alleles (64, 71 %) are heterozygous. In conclusion, it is detennined that the genetic quality ofthe breeders is high, the FCP Samuel 0616 bull showed more suitable characteristics of commercial interest. It is recommended that Estación Experimental Pastaza carry out similar analyses on new groups of cattle broodstock to maintain a database for further studies

Evaluación del efecto crioprotector de diferentes fuentes de antioxidantes en el semen bovino

En Chihuahua – México, en la Unión Ganadera Regional y Universidad Autónoma de Chihuahua, se evaluó diferentes concentraciones de antioxidantes Cisteína 2mM, Cafeína 5mM, ácido Ascórbico 4.5 mg/ml en un diluyente comercial más un tratamiento control para analizar calidad del semen: viabilidad %, motilidad progresiva %, integridad de membrana %, integridad acrosomal %. Se utilizó 6 eyaculados de diferentes animales, obtenidos mediante el uso de un electroeyaculador. El experimento se manejó bajo un DBCA, los resultados obtenidos fueron sometidos a una prueba estadística Tukey a una P ≥ 0.05. Los datos presentados para las variables mencionadas no mostraron diferencias estadísticas significativas; el beneficio/costo fue $1.63 para el tratamiento control. Bajo las condiciones técnicas y de recursos en las que se ejecutó esta investigación, la utilización de una fuente de antioxidantes extra en el diluyente comercial para la criopreservación de semen bovino, no mejora las características de calidad seminal.Regional Livestock Union and Autonomous University of Chihuahua - Mexico, evaluated different concentrations of antioxidants; cysteine 2mM, Caffeine 5mM, ascorbic acid 4.5 mg / ml in a commercial diluent, plus a control treatment to analyze semen quality: Viability$ 1.63 for the control treatment. Under the technical conditions and resource in that this research was carried out, the use of a source of extra antioxidants in the commercial diluent for cryopreservation of bovine semen did not improve seminal quality characteristics

Nuevos métodos integrados de evaluación de la calidad seminal en vacuno

[EN] he general aim of the present study was to apply a method of fluorescent multiple analysis developed by the group TECNOGAM in the study of the motility and morphometry of the spermatic subpopulations and improving hypo - osmotic test . Three studies were conducted using frozen semen of Friesian bulls as animal model . In three studies the image analysis was conducte d with the ImageJ free software, and the statistical analysis of the data using the analysis of variance (ANOVA), followed by Tukey's test. In the s tudy 1 , the percentage motile sperm atozoa in the fluorescent subpopulations was determined . The fluorochromes allowed a rapi d determination of the plasma membrane and acrosome integ rity of sperm . The subpopulation with intact plasma membrane and acrosome displayed a hi gher percentage of mot ile sperm with the damaged membrane were motile. In the stud y 2, the morphometric parameters of the head, nucleus and acrosome of the sperm subpopulations and of 3 treatments: liquid samples immobilized with formaldehyde (1) and with shock for heat 65°C - Trumorph® (2), dried, fixed smears dyed with IP/PSA (3) were compared. The area of the head, nucleus and acrosome were lower (P <0,05) in smears than it wet mounts treatment s. However, no significant differences in the sperm morphometry of the two treatments in the wet mounts were found. The subpopulation with acrosome normal, damaged membra ne presented significantly higher measures (P <0,05) compared with the subpopulation with acrosome normal, membrane intact , for both treatments in wet mounts. The percentage of t he head occupied by the acrosome in the smears wereas higher that those of the treatments in wet mounts. Finally, in the study 3, the effect of hypos - osmotic test (HOST), two types of solu tions based on citrate and TRIS , a nd the test water ( WT) on t he distribution of the sperm subpo pulations. The final osmolarity was adjusted to 150 mOsm/kg in all the cases. The pH was adjusted to 7.0 based only on the TRIS solution . The subpopulations were determined at 5 and 40 min from incubation to 37°C. The response to HOST, the state and acrosome membrane integrit y were used to establish eight subpopulations . For both periods of incubation, the subpo pulation HOST negative, acrosome damaged, damaged membrane was significantly higher in the WT that in both HOST solutions evaluated (P <0.05). At 40 min, the subpop ulat ion, HOST positive, acrosome i ntact, intact membrane was lower in the WT t hat in the HOST when citrate - based solution was used . The new met hod of multiple fluorescent staining allowed, for the first time, to study in the same sperm atozoa the integrity of the plasma membrane and acrosome, functionality and motility, obtaining diffe rent the sperm subpopulations. The ability of these new methods of analysis to predict sperm fertility will be addressed in future studies.[ES] Se trabajará sobre el desarrollo de nuevos métodos de evaluación de la calidad seminal en rumiantes, que estarán basados en una tinción múltiple fluorescente del espermatozoide, lo que permitirá evaluar simultáneamente diferentes parámetros con relevancia funcional y, potencialmente, mejorar la capacidad predictiva de la fertilidad del semenSánchez Caycho, KL. (2016). Nuevos métodos integrados de evaluación de la calidad seminal en vacuno. http://hdl.handle.net/10251/66376TFG

Efecto de tres suplementos macromoléculas (pva, pvp y bsa) sobre la tasa de maduración, division y desarrollo embrionario in vitro de ovocitos bovinos procedentes de ovarios obtenidos de camal

El presente estudio se realizó para evaluar el efecto de cuatro suplementos de macromoléculas sobre la tasa de maduración nuclear, así como también determinar la tasa división de ovocitos y desarrollo embrionario posterior a la fecundación a las 48 horas y 168 horas (7 días), respectivamente. Los ovarios fueron obtenidos de animales sacrificados, transportándose al laboratorio en un termo conteniendo solución salina al 0.09%, suplementada con antibiótico-antimicótico a 37 °C. Los CCO´s se obtuvieron de la aspiración de folículos de entre 2-6mm; luego de ser observados en un estéreomicroscopio, 692 ovocitos con dos o más capas de células fueron calificados como aptos para ser madurados en medio TCM-99 enriquecido con suplemento de macromolécula: PVP o PVA o BSA o SFB según sea el tratamiento; cultivados a 39°C bajo una atmósfera de 5% de CO2. Cumplido el tiempo de maduración (24 horas), los ovocitos fueron removidos del medio y lavados con PBS suplementado con SFB y 1 mg/ml de hialuronidasa, para ser fijados en una solución de etanol: ácido acético (3:1). Para la evaluación de la maduración nuclear, se colocaron los ovocitos en una lámina portaobjeto y teñidos con 1% de orceína; las mismas fueron observadas bajo un microscopio para ser evaluadas y clasificadas como Vesícula Germinal (VG), Metafase I (MI), Anafase-Telofase, Metafase II (MII) y degenerados. Para la fecundación se usaron 1680 ovocitos, madurados bajo las mismas condiciones y fecundados con espermatozoides obtenidos de pajillas. Para la obtención de los espermatozoides motiles se centrifugo a 300 gravedades durante 10 minutos bajo una gradiente de Percoll (45/90); el sobrenadante fue retirado y el pellet obtenido retirado para ser reconstituido con TL-STOCK. Los ovocitos maduros y espermatozoides fueron co-cultivados durante 18 horas a 39°C con 5% de CO2 en medio de cultivo KSOM-AA; luego de 48 horas las células cocultivadas fueron trasladadas al medio de cultivo SOF. En el experimento 1, en los ovocitos que alcanzaron la maduración nuclear (Metafase II) se encontró diferencia significativa solo entre los suplementos de macromolécula PVA y SFB con 19.3 + 1.8 y 16.3 + 0.8, respectivamente; mientras que en los grupos PVP, PVA, BSA y PVP, BSA, SFB, respectivamente no se encontró diferencia estadística significativa. En el experimento 2, la tasa de división y desarrollo embrionario posterior a la fecundación a las 48 horas y 168 horas, respectivamente no se encontró diferencia estadística significativa. Estos resultados indican que los suplementos de macromoléculas proporcionan condiciones y requerimientos importantes para la progresión desde estadios de metafase I a metafase II. Palabras claves: Maduración In vitro, ovocitos bovinos, fecundación In vitro.--- The present study was made to evaluate the effect of four macromolecule supplements on the rate of nuclear maturation, as well as to determine the rate division of oocytes and embryonic development subsequent to the fertilization to the 48 hours and 168 hours (7 days), respectively. The ovaries were obtained from sacrificed animals, being transported to the laboratory in a thermos flask containing saline solution to the 0,09%, with antibioticantimycotic at 37 °C. The CCO´s was obtained from the aspiration of follicles of between 2-6mm; after being observed in stereomicroscope, 692 oocytes with two or more layers of cells were described like apt being in the middle matured TCM-99 enriched with macro-molecule supplement: PVP or PVA or BSA or SFB according to are the treatment; cultivated at 39°C under an atmosphere of 5% of CO2. Turned the time of maturation (24 hours), the oocytes were removed of means and washings with PBS supplemented with SFB and 1 mg/ml of hyaluronidase, to be fixed to an ethanol solution: acetic acid (3: 1). For the evaluation of the nuclear maturation, the oocytes on the slide and dyeings with 1% of orceína were placed; the same ones were observed under a microscope to be evaluated and to be classified like germinal vesicle (VG), metaphase I (MI), anaphase-telophase, metaphase II (MII) and degenerated. For the fertilization 1680 oocytes, matured under the same conditions and fertilized were used with obtained spermatozoa of tubules contained it.. For the obtaining of the motile spermatozoa by centrifuge myself to 300 gravities during 10 minutes under a gradient of Percoll (45/90); the supernatant was retired and pellet obtained retired to be reconstituted with TL-STOCK. The mature oocytes and spermatozoa Co-were cultivated during 18 hours to 39°C with 5% of CO2 in the middle of culture KSOM-AA; after 48 hours the Co-cultivated cells were transferred to means of culture SOF. In experiment 1, in the oocytes that reached the nuclear maturation (Metaphase II) was single significant difference between the macromolecule supplements PVA and SFB with 19.3 + 1.8 and 16.3 + 0.8, respectively; whereas in groups PVP, PVA, BSA and PVP, BSA, SFB, respectively was not significant statistical difference. In experiment 2, the rate of division and embryonic development subsequent to the fertilization to the 48 hours and 168 hours, respectively was not significant statistical difference. These results indicate that the macromolecule supplements they provide conditions and important requirements for the progression from stages of metaphase I to metaphase II. Key words: In vitro Maturation, oocytes bovine, In vitro fertilization.Tesi

Pasantía en el Laboratorio de Biotecnología Animal de la Facultad De Ciencias Agrarias del Politécnico Colombiano Jaime Isaza Cadavid

1 recurso en línea (79 páginas) : ilustraciones color, tablas, figuras.La realización de la pasantía en el laboratorio de biotecnología animal del Politécnico Colombiano Jaime Isaza Cadavid permitió conocer, aprender y tomar destreza en los procesos de biotecnología reproductiva que se llevan a cabo en este lugar, tales como inseminación artificial, criopreservación de semen, sexado de espermatozoides, súper ovulación, transferencia de embriones, fertilización in vitro (FIV) y clonación, son usadas para mejorar la eficiencia reproductiva.Bibliografía y webgrafía: páginas 71-79.PregradoMédico Veterinario Zootecnist